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尖锐湿疣常用的五种诊断方法 武汉男科医院

来源:武汉博大医院(文章内容仅供参考,不作为诊断及医疗依据) 更新时间:2018-11-14

健康导读

  

    一、醋酸白试验用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟,病灶部位变白稍隆起,肛门病损可能需要。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果,HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同,只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高,它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示,醋酸白试验并不是特异试验,且假阳性较常见。

    二、免疫组织学检查常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法(即PAP),显示湿疣内的病毒蛋白,以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时,尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。

    三、组织化学检查取少量病损组织制成涂片,用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原,则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶(PAP)方法中,核可被染成红色。此法特异性强且较迅速,对诊断有帮助。

    四、病理检查主要为角化不全,棘层高度肥厚,乳头瘤样增生,表皮突增厚,延长,其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则,且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大,胞浆着色淡、中央有大而圆,深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣,表皮极度向下生长,代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混,故须多次活检。若有缓慢发展之倾向, 则为一种低度恶变的过程,即所谓疣状癌。

    五、基因诊断迄今,HPV难于用传统的病毒培养及血清学检测,主要实验诊断是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。

    (一)标本的采集及处理 .标本的采集和预处理:用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时,将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,0min)洗涤2次,沉积细胞重悬于mlPBS中,取0.5ml细胞悬液抽提DNA。 2.标本核酸的提取:按体积细胞悬液加0倍体积的细胞裂解液(0mmol/L Tris-HCl,pH 7.4,0mmol/L EDTA,50mmol/L NaCl,0.4%SDS,.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(:),氯仿/异戊醇(24:)各抽提2次;加/0体积3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加体积乙醇洗涤次;用60μl含RNA酶(00μg/ml)的TE液(0mmol/L Tris-HCl,pH 8.0,.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。

    (二)PCR扩增 . 引物设计和合成:HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L),每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明,各型HPV的非编码区及E、E6、E7和L区均有保守序列。Manos等从HPVL区中选择保守序列设计合成引物MY和MY09见表,该引物与HPV 6、、6、8及33型有互补序列,也可扩增其它型HPV。 2.PCR反应试剂:Taq DNA聚合酶(2U/ml)、0mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0mmol/L),0×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、00mmol/L Tris-HCl、pH 8.5),00μmol/L MY和MY09贮备液,的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。 3.PCR扩增方法和程序:以00μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。()实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂(2)各反应管依次加入0μl标本和90μl预混反应试剂。

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